Flavin-tag: exploiting a flavin transferase for protein labeling and engineering

Ontwikkeling van methode om eiwitten te markeren via enzymen

Voor het onderzoeken van de functie van eiwitten op moleculair niveau is markering van die eiwitten zeer waardevol. Er is een veelvoud aan modificatie-technieken ontwikkeld om eiwitten te labelen gebaseerd op chemische en/of enzymatische methoden. De laatstgenoemde zijn doorgaans afhankelijk van een specifieke peptidesequentie (een ‘tag’) die kan worden herkend en gebruikt door bepaalde eiwit-modificerende enzymen.

In de natuur bezitten sommige bacteriën een flavinetransferase (ApbE genaamd) dat in staat is om door middel van een covalente binding een FMN cofactor te introduceren in het zogenaamde FMN-bindende motief van bepaalde redoxenzymen en van eiwitten waarvan de rol nog moet worden vastgesteld. Gebaseerd op dit flavinetransferase en de bijbehorende geconserveerde peptide-herkenningssequentie heeft Yapei Tong een algemene enzymatische plaats-specifieke eiwitlabel-methode ontwikkeld: de flavine-tag-methode.

In zijn proefschrift beschrijft Tong de ontwikkeling, optimalisatie en toepassing van de flavine-tag-methode. Hij heeft ook een multi-FMN-bindend eiwit van Streptomyces azureus (SaFMN3) tot expressie gebracht en gekarakteriseerd waarvan hij verwachtte dat het drie covalent gebonden FMN’s bevat. Hierbij heeft Tong sommige van de biochemische eigenschappen van zo’n extracellulair multi-FMN-bindend eiwit kunnen ontrafelen.

Het promotieonderzoek van  Yapei Tong vond plaats bij de afdeling Biotechnologie van het Groningen Biomolecular Sciences and Biotechnology Institute (GBB) met financiering via de Chinese Scholarship Council.

Proefschrift: https://hdl.handle.net/11370/c6b8f56e-35a4-42ec-8a8a-21ba5205eb5a