Skip to ContentSkip to Navigation
Over onsNieuws en agendaNieuwsberichten

The bacell factory and therapeutic proteins

12 september 2008

Promotie: mw. L. Westers, 14.45 uur, Academiegebouw, Broerstraat 5, Groningen

Proefschrift: The bacell factory and therapeutic proteins

Promotor(s): prof.dr. W.J. Quax

Faculteit: Wiskunde en Natuurwetenschappen

 

Optimaal productiesysteem voor hIL-3 door Bacillus subtilis

Het onderzoek van Lidia Westers was erop gericht de bacterie Bacillus subtilis te optimaliseren voor de productie van grote hoeveelheden eiwit. Het uiteindelijke doel is dat deze niet-schadelijke bacterie ingezet kan worden voor de productie van farmaceutische eiwitten, zoals humaan interleukine-3 (hIL-3) dat naast andere medicatie wordt gebruikt bij chemotherapie.

Voor productie van hIL-3 testte zij verschillende B. subtilis stammen waarin proteasegenen geïnactiveerd zijn. Ook optimaliseerde zij de promotoren op het overexpressie-plasmide en gebruikte verschillende signaalpeptiden om secretie van hIL-3 in het kweekmedium te bevorderen. Door tevens de kweekmedia te variëren vond zij uiteindelijk een optimaal productiesysteem voor hIL-3.

Westers maakte van hIL-3 19 varianten op de positie van Glu22 met de bedoeling om een variant te maken met andere bindingseigenschappen aan de hIL-3-receptor. De meeste varianten lieten sterk verlaagde bioactiviteit op leukemiecellen zien. Bindingsexperimenten met behulp van Biacore lieten zien dat de meeste van deze minder actieve varianten nog wel aan de specifieke α-subunit van de receptor binden. Van één van de minst actieve varianten toonde Westers aan dat er geen hIL-3/hIL-3-R complex meer gevormd wordt.

De productie en het uitscheiden van grote hoeveelheden “niet-eigen” eiwitten leidt in B. subtilis tot een stressrespons, die de uiteindelijke opbrengst van het gewenste eiwit wellicht verlaagt. Deze zogenaamde secretie-stressrespons is nader bestudeerd. Zo toonde Westers aan dat de intensiteit van deze respons in sommige gevallen gebruikt kan worden als een indicator voor het eiwitproductieniveau.

 

Lidia Westers (Ten Boer, 1973) studeerde biologie aan de Rijksuniversiteit Groningen, waar zij haar promotieonderzoek deed bij de vakgroep Farmaceutische biologie. Haar onderzoek werd gefinancierd door SenterNovem. Inmiddels is zij onderwijscoördinator aan de RUG bij Farmacie. /FC

Laatst gewijzigd:15 september 2017 15:38
printOok beschikbaar in het: English

Meer nieuws